В настоящее время в связи с повышением требований к качеству и количеству потомства у высокопородных животных, в частности собак, большим спросом пользуется диагностика качества кобелей-производителей.
Для диагностики репродуктивной функции кобелей необходимо изучить в первую очередь наличие или отсутствие инфекций половых путей, которые влияют на процесс сперматогенеза, а также провести диагностику всех фракций эякулята. Кроме того, для заключения по качеству кобеля-производителя необходимо знать качество полученного потомства: только заключения по качеству спермы недостаточно.
План обследования кобеля:
1. анамнез, осмотр;
2. диагностика на урогенитальные инфекции;
3. исследование эякулята.
Анамнез и осмотр
У хозяина необходимо выяснить возраст кобеля, количество вязок и количество продуктивных вязок. Имеет значение количество щенков в помете, их здоровье и качество (породные пороки, пороки развития и окраса).После сбора анамнеза необходимо провести тщательный осмотр производителя. В первую очередь это касается репродуктивных органов. Произошло ли опущение семенников в мошонку, плотность, болезненность, атрофия или гипертрофия яичек.
Большое значение имеет упитанность кобеля: при ожирении нарушается температурный баланс в яичках и, как следствие, происходит нарушение сперматогенеза. Истощение, наоборот, как правило опосредованно свидетельствует о нарушении обмена жирорастворимых витаминов, в первую очередь витаминов Д и Е, что также нарушает процесс выработки и созревания сперматозоидов.
Осмотр полового члена и препуция необходим для выявления возможных травм, деформаций, стриктур уретры, наличия фимоза и парафимоза. Данные патологии не влияют на качество спермы, но нарушают сам процесс оплодотворения, делая его болезненным или невозможным.
Диагностика простаты включает в себя ректальное исследование, при необходимости – УЗИ-диагностику. Хотя проблемы простаты и не влияют на процесс сперматогенеза, они могут вызвать нарушения процесса оплодотворения – болезненные садки, малое количество промывающей и проталкивающей фракции спермы, бактериальные инфекции могут вызвать проблемы с оплодотворением и вынашиванием плодов. Специальные исследования состоят из микроскопии третьей фракции эякулята и ее бактериологического посева с подтитровкой антибиотиков. При необходимости проводится биопсия.
Диагностика урогенитальных инфекций
Бактериальные инфекции диагностируются при микроскопии и бактериологическом посеве смегмы и эякулята. Большое количество смегмы – вариант нормы, в ней может присутствовать множество лимфоцитов и условно патогенных бактерий. Поэтому патологической смегма считается только при обнаружении в бакпосеве патогенных и устойчивых бактерий. На сегодняшний момент единственным известным патогеном является Brucella canis.Из инфекций, имеющих значение в урологии и гинекологии, наиболее значимыми являются токсоплазмоз, бруцеллез, герпес и уреаплазмоз. В меньшей степени – микоплазмоз и хламидиоз (по последним данным – Сятковская, 2013 – хламидиоз у собак никогда не вызывает проблем репродуктивной системы).
В нашей практике наиболее часто используются серологические методы диагностики – ИФА и ИХГ. Отличие состоит в том, что при ИФА-диагностике определяется уровень антител в сыворотке крови (следует иметь в виду, что наличие антител к инфекциям не всегда говорит о наличии самой инфекции, возможно носительство поствакцинальных антител или переболевание и самовыздоровление), а при ИХГ определяется наличие антигена (минусом является низкая чувствительность тестов и возможность ложноположительных и ложноотрицательных результатов).
Исследование эякулята
Для стимуляции и ускорения процесса забора семени применяют два основных метода – присутствие течной суки (не всегда возможно) и применение ватки, смоченной вагинальными выделениями течной суки (можно хранить в хорошо закрытой посуде в замороженном виде, перед применением необходимо разогреть).Забор семени у мелких кобелей проводится на столе, у крупных – на полу (фото 1).
Сначала необходимо вызвать первичную эрекцию, для этого производят движения крайней плотью вперед-назад, плотно, но не сильно обхватывая ее ладонью. Затем сдвигают крайнюю плоть назад для освобождения пениса. После набухания бульбус гландис зажимают или ритмично сдавливают основание пениса большим и указательным пальцами. Для ускорения процедуры забора жидкости можно свободной рукой производить одновременное нажатие на простату ректально.
Для исследования необходимо отдельно собрать все три фракции эякулята:
- Простатическая жидкость.
0,5-2 мл. Вырабатывается простатой. Содержит много поверхностных эпителиальных клеток, возможно наличие бактерий и мочевых солей, т.к. она промывает уретру. Выделяется самой первой во время активных движений кобеля. Должна быть прозрачной. - Спермосодержащая фракция.
0,5-1 мл. Вырабатывается семявыносящими протоками. Содержит большое количество спермиев, незначительное количество лейкоцитов и не содержит бактерий. Белого цвета. Выделяется при сокращении уретры. Кобель в этот момент, как правило, не двигается. После забора фракцию необходимо немедленно установить на подогреваемую поставку (t 35-38ºС) - Простатическая жидкость.
до 20 мл. Вырабатывается простатой. Наиболее значима для диагностики заболеваний простаты. Длительный контакт со спермиями вызывает снижение их активности. Прозрачная. При воспалительных процессах простаты содержит большое количество лейкоцитов, эпителиальных клеток и небольшое количество спермиев (фото 2).
Исследование качества спермы
Объем эякулята определяется с помощью градуированной пробирки.Концентрация сперматозоидов (количество) подсчитывается в камере Нейбауэра или камере Фукса-Розенталя с предварительным разведением второй фракции 1:200 дистиллированной водой. Нормальное значение концентрации сперматозоидов колеблется в пределах 300-800 млн в 1 мл. Общее количество сперматозоидов за эякуляцию определяется путем умножения концентрации сперматозоидов на объем второй фракции эякулята. Нормальное значение для здоровых собак составляет 300-1000 млн сперматозоидов за эякуляцию.
Активность спермиев определяется на основании процента подвижности и качества их движения. Оценка производится на теплом предметном стекле микроскопа при увеличении ×100 или ×400 (фото 3). Нормальным считается, если более 80% (в идеале 90%) сперматозоидов имеют активное поступательное движение (быстро движутся вперед). При преобладании колебательных или круговых движений необходимо проверить температуру предметного стекла и при необходимости нагреть его до t 35-38ºС.
Оценка морфологии сперматозоидов проводится после изготовления мазка и окраски методом дифф-квик или лейкодиф (можно красителем эозин-нигрозин). Нормой считается наличие более 80% морфологически нормальных сперматозоидов. Патологические формы спермиев могут быть связаны с патологией развития (первичные и вторичные аномалии) и с деформацией при заборе и исследовании пробы (третичные аномалии). При обнаружении более 30% первичных и вторичных аномалий необходимо рассмотреть вопрос об исключении кобеля из воспроизводства. Однако следует учитывать, что процесс сперматогенеза и выведения готовых сперматозоидов длительный и занимает около 8 недель, поэтому если в анамнезе присутствуют травмы мошонки, гипертермия или гормональные сбои (гипоталамус, гипофиз или щитовидная железа), с момента которых прошло менее 8 недель, то следует провести повторные исследования через 2 месяца.
К патологиям развития спермиев относятся: аномалии головки (дублирование, проксимальные цитоплазматические капли, шишки, кратеры), аномалии шейки (гнутая шейка, проксимальная цитоплазматическая капля) и аномалии хвостика (дублирование, согнутый хвостик, свернутый хвостик и т.д.) (рис. 1).
Следует иметь в виду, что сперматогенез происходит в семенных канальцах яичек. К необходимым условиям правильного сперматогенеза относятся:
- отсутствие патологии развития или травмы половых органов;
- возраст кобеля (сперматогенез начинается с 4 месяцев, но в эякуляте зрелые сперматозоиды появляются только в возрасте 10-12 месяцев);
- отсутствие половых инфекций (бактериальные инфекции, вирус герпеса и др.);
- температурный контроль (поддерживается за счет расположения семенников, сосудов и работы мышц, регулирующих расположение мошонки по отношению к телу);
- правильная работа желез внутренней секреции (ЖВС) – гипоталамуса и гипофиза, яичек. Гормоны (рилизинг-гормон, андрогены, лютеинизирующий и фолликулостимулирующий гормоны) осуществляют контроль сперматогенеза по принципу обратной связи.
При обнаружении снижения фертильности за счет уменьшения количества и активности сперматозоидов более чем на 50%, а также обнаружения более 30% аномальных спермиев (первичные и вторичные аномалии) необходимо исключить возможные причины нарушения сперматогенеза или применить анаболические стероиды с контролем исследования спермы через 2-3 месяца. При сохранении данных патологий рекомендуется исключить кобеля из процесса воспроизводства.
vetpeterburg