Химическое и ультраструктурное исследования пластиковых пленок, применяемых для окклюзии портосистемных шунтов хирургическим путем у собак и кошек
Исследования в области ветеринарной медицины

Химическое и ультраструктурное исследования пластиковых пленок, применяемых для окклюзии портосистемных шунтов хирургическим путем у собак и кошек

Авторы: Элинор Дж. Филд1, Дэвид Дж. Скар2, Мэттью Дж. Пигготт2, Томас С. Андерсон1, Гийом П. Шануа1

1Бристольский университет, Факультет науки и здоровья, Бристольская ветеринарная школа, Соединенное Королевство.
2Ноттингемский университет, Фармацевтическая школа, Отделение передовых материалов и технологий здравоохранения, Соединенное Королевство.

Ключевые слова: портосистемный шунт, целлофановый бандаж, тонкая пластиковая пленка, химия, спектроскопия.

Введение

Применение целлофановых бандажей для окклюзии портосистемных шунтов у собак и кошек является общепринятым методом лечения18. Были разработаны многочисленные рекомендации относительно установки и обеспечения функционирования целлофанового бандажа вокруг шунта, включая рекомендуемую плотность бандажа, его ширину, степень частичной окклюзии на момент установки, количество и направление металлических клипс, удерживающих бандаж на месте7,8,13,22,23.
В идеале данная процедура должна быть эффективной, воспроизводимой (одинаковый исход в случае применения различными хирургами одного и того же вида «целлофановых бандажей») и обладать повторяемостью (например, одинаковый исход в случае применения одним хирургом различных «целлофановых бандажей»). К сожалению, механизм, в ходе которого применение «целлофанового бандажа» индуцирует частичную или полную окклюзию аномального сосуда – шунта, плохо исследован и, предположительно, связан с реакцией на чужеродное тело, вызванной установкой бандажа вокруг сосуда. Примечательно, что достаточно часто наблюдается сохранение шунта после операции с применением целлофановых бандажей, и данное явление наблюдается в 18,6–35% случаев11,12,14,16.
Недавнее исследование19 было нацелено на определение механических и спектроскопических характеристик четырех тонких пластиковых пленок (ТПП), которые позиционировались как целлофан и применялись в клинических условиях для окклюзии портосистемных шунтов у собак и кошек. Три образца из четырех по составу не соответствовали целлофану и содержали в основном полиэфирные волокна или волокна с олеиновой кислотой. В связи с этим появилась гипотеза, что воспалительный ответ, индуцированный пленкой, возник не из-за ее химического состава как такового, а из-за веществ, которые были добавлены во время ее изготовления. Вспомогательные вещества добавляют в состав полимерных пленок для улучшения их свойств и продления срока их службы. Часто при изготовлении ТПП используют добавки дицетилфосфата в качестве вымывающего агента10,21. Было доказано, что этот агент приводит к выраженному воспалительному ответу у подопытных животных, и предполагалось, что он индуцирует воспалительный ответ, наблюдаемый при использовании целлофана4,5,19. Для выявления факта наличия этого агента в составе ТПП требуются методы, позволяющие определить особенности материалов на молекулярном уровне. 
Исследования в области биоматериалов и хирургических имплантатов задействуют группу передовых технологий для оценки особенностей этих материалов на молекулярном уровне. Инфракрасная спектроскопия нарушенного полного внутреннего отражения (ИК-спектроскопия НПВО), рентгеновская фотоэлектронная спектроскопия (РФЭС) и времяпролетная масс-спектрометрия вторичных ионов (МСВИ) – это методы исследования поверхности, каждый из которых предоставляет информацию с различной глубиной аналитической оценки и взаимодополняющими физико-химическими данными17.
ИК-спектроскопия НПВО и РФЭС были успешно задействованы для исследования различных биоматериалов в медицине человека и в ветеринарии1,2,6,15,20. По отдельности эти методы могут быть недостаточно чувствительными для определения состава поверхности материала (< 10 нм). Однако времяпролетная МСВИ способна осуществлять аналитическую оценку на глубине нескольких атомных слоев и может также использоваться в динамическом плане (профиль распределения примеси в глубине), определяя очень низкие концентрации, такие как миллиардные доли3.
Цель данного исследования состояла в применении современных методов характеризации химического состава и физических свойств значительного количества ТПП, используемых для окклюзии портосистемных шунтов. Исследование было проведено с акцентом на анализ идентичности, однородности, распределения (на поверхности и материалов в основной массе), а также относительной концентрации раздражающих веществ, таких как дицетилфосфат.

Авторы рассматривали следующие гипотезы:
  1. У внутрипленочного состава и среди составов различных пленок будет наблюдаться значительная степень однородности. 
  2. Раздражающие вещества неизменно будут присутствовать на поверхности либо в основной массе пленок.

Материалы и методы

Образцы материалов, применяемых для окклюзии портосистемных шунтов у собак и кошек, были получены из специализированных учреждений Европы и Северной Америки. Эти образцы были подвергнуты анализу посредством проведения серии методов характеризации химического состава поверхности, подповерхностных участков, а также основной массы материалов. Все образцы пленки были подвергнуты трем химическим анализам в естественном виде, а также спустя шесть недель после воздействия плазмы. Химические анализы, задействованные в исследовании: ИК-спектроскопия НПВО для оценки химических особенностей подповерхностных участков (основной массы), РФЭС для количественной оценки элементного химического состава поверхности и времяпролетная МСВИ для определения изменения профилей распределения химических элементов  на поверхности и по глубине. Степень толщины данных образцов ТПП измерялась непосредственно благодаря электронным микроснимкам, полученным с помощью сканирующего электронного микроскопа (СЭМ). Химический состав определялся по возможности посредством совмещения методов и обращения к справочным библиографическим источникам (собственным и специально разработанным для анализа биоматериалов). К тому же два образца каждой ТПП прошли стерилизацию паром и этиленоксидом, после чего их сравнили с нестерильными образцами посредством традиционной ИК Фурье-спектроскопии (ИКФС). 
ИКФС.  По два образца каждого вида ТПП прошли стерилизацию: один – посредством пара (автоклав при температуре 121 °С в течение 21 мин.), а другой – посредством стерилизации этиленоксидом. Два нестерильных образца были проверены с помощью ИКФС (Perkin Elmer Spectrum 100 PerkinElmer Life and Analytical Sciences) в диапазоне 4–7000 см-1 – 100 см-1
Спектроскопические профили стерилизованных групп образцов сравнили с нестерилизованными для оценки факта наличия или отсутствия воздействия метода стерилизации на химический состав.
ИК-спектроскопия НПВО проводилась при помощи спектрофотометра приставкой НПВО с алмазным кристаллом (Agilent Cary 630 FTIR Spectrophotometer with diamond ATR module and MicroLab FTIR software v.4.0, Agilent Technologies). При НПВО используется кристалл, напрямую контактирующий с поверхностью, представляющей интерес для изучения химического состава образцов. ИК-излучение полностью отражается от внутренней поверхности кристалла. Это создает ортогональную затухающую волну, которая направляется на образец, и в результате фиксируется поглощение этой энергии и отраженное излучение. Такой метод отличается от традиционной ИКФС, при которой фиксируется передача ИК-излучения сквозь тонкий образец (< 50 мкм) или образец, запрессованный в специально подготовленную таблетку бромида калия. 
ИК-спектроскопия НПВО позволяет провести анализ «реальных» образцов в их естественном состоянии и сфокусироваться на химическом составе поверхности и подповерхностных участков. Значения фонового ИК-излучения (32) были зарегистрированы после очистки кристалла. Затем образцы разместили на отполированной рабочей поверхности кристалла НПВО и проанализировали после обеспечения хорошего контакта с кристаллом. Спектральное разрешение составило 2 см-1 в диапазоне 650–4000 см-1.
РФЭС. Образцы были проанализированы с помощью рентгеновского фотоэлектронного спектрометра (Kratos AXIS ULTRA Kratos Analytical Ltd.) с монохроматическим источником рентгеновского излучения Al kα (1486,6 эВ), который работает при величине 10 мА эмиссионного тока и напряжении на аноде 12 кВ (120 Вт). Каждый образец был подвергнут сканированию в максимально широком диапазоне энергии с высоким разрешением. Пиковые показатели в максимально широком диапазоне использовались для расчета атомной концентрации элементов с помощью факторов относительной чувствительности базы данных Kratos. Обработка данных осуществлялась с использованием программного обеспечения CasaXPS и учетом факторов относительной чувствительности базы данных Kratos для определения атомной процентной концентрации от пиковых значений. 
Времяпролетная МСВИ. Образцы были проанализированы посредством спектрометра (oF-SIMS IV, ION-TOF GmbH) с использованием жидкометаллического источника ионов висмута (а именно Bi3+) с ускоряющим напряжением 25 кВ с одноступенчатым рефлектроном. Для анализа поверхности была задействована область 500 × 500 мкм при разрешении 256 × 256 пикселей для 15 сканирований. Поскольку образцы обладали плохой проводимостью, применялась система компенсации заряда в виде потока низкоэнергетических электронов (< 20 эВ) и использовался статический режим МСВИ с плотностью первоначальных ионов < 1 × 1012 ионов/см2
Профилирование образца по глубине осуществлялось посредством пушки ионного распыления 10 кэВ Ar1000+ (аргоном) зоны кратера размером 400 × 400 мкм и анализом центральной зоны размером 200 × 200 мкм. Профилирование образца по глубине проводилось «неперемежающимся» (non-interlaced) образом, при котором после одного анализа образец подвергался ионному распылению в течение 5 сек. Сбор и анализ данных производились с использованием программного обеспечения приборов (SurfaceLab 6, ION-TOF GmbH).
СЭМ. Образцы пленки были установлены под углом 90° на алюминиевые стойки и зафиксированы углеродной лентой. Образцы подвергались распылению ионов золота на протяжении 4 мин. зарядом в 24 мА, который осуществлялся системой ионного распыления Leica EM SCD005, выбранной благодаря ее способности обеспечивать визуализацию в глубоком вакууме. Для получения электронных микроснимков был задействован сканирующий электронный микроскоп (JEOL 6060LV variable pressure scanning electron microscope). СЭМ эксплуатировался в режиме глубокого вакуума при увеличении от 940 до 1600 раз. Были зафиксированы три изображения каждой пленки, и с помощью программного обеспечения микроскопа были проведены замеры толщины двух пленок из каждого набора. Из-за распыления ионов золота замеры толщины пленки проводились с учетом этого воздействия. 
Статистический анализ. Однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) был проведен для определения статистических различий в толщине образцов, был принят показатель статистической значимости на уровне (Р-уровень) < 0,05.

Результаты

Было получено тринадцать образцов ТПП и один образец целлофана с известным составом (контрольный образец 1). Контрольный образец был предоставлен базой охарактеризованных образцов школы химии Бристольского университета.
ИКФС. После стерилизации паром из обоих окрашенных образцов (12 и 13) в стерилизуемую упаковку выделился пигмент красителя. Однако между стерильными (очищенными этиленоксидом или паром) и нестерильными образцами не было выявлено различий показателей ИКФС. Все последующие анализы проводились с использованием нестерильных образцов. 

ИК-спектроскопия НПВО. Данные, полученные при исследовании когорты образцов, наглядно продемонстрировали, что не всем образцам пленок были присущи одинаковые химические особенности. Были выявлены три разные группы пленок в соответствии с их химическими особенностями, к четвертой группе были отнесены два резко отличающихся образца (на рис. 1 изображена химическая «идентичность» подповерхностных участков бандажей). Первая группа состояла из 3 образцов (пленки 1, 2 и 10), и ее спектральные характеристики соответствовали целлофану. Вторая группа насчитывала 5 образцов (пленки 4, 6, 7, 9 и 13), и ее спектральные характеристики соответствовали полипропилену. Образцы 5, 8, 11 и 14 были причислены к третьей группе, и их характеристики, полученные в ходе ИК-спектроскопии НПВО, на первый взгляд показались весьма похожими на характеристики образцов целлофана (первая группа), однако были выявлены значительные отличия. Эти отличия, по сравнению с первой группой, заключались в снижении интенсивности полос O-H и C-O, а также в более выраженных (или новых) пиках в значениях ~1650 см−1 и ~1280 см−1. Первое значение из вышеуказанных, скорее всего, является характеристикой выраженной С-С полосы, а второе – вариацией химического состава С-О группы. Эти данные свидетельствуют о том, что пленки обладают особенностями, характерными для целлофана, но с определенными видами изменений и вариаций. 
Образцы 3 и 12 отнесли к четвертой группе как не соответствующие требованиям. У образца 3 были выявлены разнородные спектральные данные ИКФС по сравнению со всеми другими образцами, что свидетельствует об уникальном химическом составе. У образца 12 были обнаружены схожие спектральные характеристики с образцами второй группы, то есть с химическими показателями полипропилена. Для образцов пленок четвертой группы не было выявлено точных совпадений, поэтому рекомендуется проводить дальнейшие исследования для расширения работы по идентификации данных образцов.


В 1-й группе: интенсивная и широкая полоса валентных колебаний O-H обнаруживается в интервалах 3600–3100 см−1, а полоса C-H – в интервалах 2900 см−1, как и дополнительная характерная последовательность полос в интервале 1500–800 см−1 в области спектра. К ним относятся выраженная полоса валентных колебаний C-O (1040 см−1), а также полосы валентных колебаний C-H и C-H2 (1380, 1400 см−1). Во 2-й группе: для данных спектров характерны интенсивные полосы валентных колебаний CH3 в интервалах 2970 см−1 и 2910 см−1, CH2 в интервалах 2870 см−1 и 2840 см−1, деформационные колебания CH2 на частоте 1460 см−1, а растяжение связи CH3 составляет 1370 см−1. Показатели образцов 3-й группы очень сходны с 1-й группой, но со слабой интенсивностью полосы валентных колебаний O-H, вариациями значений полос валентных колебаний CH и с дополнительными пиками в области отпечатков пальцев (1500 см−1 – 500 см−1). Образцы 4-й группы обладают существенно отличающимися химическими особенностями, чтобы считаться уникальными.

МСВИ. Химия поверхности и глубины образцов тонких пленок каждой группы, выявленные с помощью ИК-спектроскопии НПВО, представлены на рис. 2 и 3 соответственно. Частично они совпадают с наблюдениями, полученными при идентификации образцов 1, 2 и 10 (первая группа) как целлофана, а образцов 4, 6, 7, 9 и 13 (вторая группа) как полипропилена с помощью ИК-спектроскопии НПВО. Целлюлоза идентифицируется благодаря выраженным пикам вторичных ионов в их спектрах, например CHO2– (масса/заряд = 44,99), C2H3O2– (масса/заряд = 59,01) и C3H3O2– (масса/заряд = 71,01), как показано на рис. 2. Химический состав, полученный в результате анализа поверхности (рис. 2), и профилирование данной серии образцов по глубине (первая группа) (рис. 3) дают основание полагать, что химический состав образцов полностью соответствует целлофану согласно данным, полученным посредством ИК-спектроскопии НПВО. 
Образцы, отнесенныe к второй группе в ходе ИК-спектроскопии НПВО, продемонстрировали пики вторичных ионов, характерные для полипропилена, такие как C2H– (масса/заряд = 25,00) и C4H– (масса/заряд = 49,00), как показано на рис. 2. Профилирование серии образцов второй группы по глубине выявило сходство химических характеристик по всей толще, что позволяет предположить однородный полипропиленовый химический состав.
У образцов, отнесенных к третьей группе при проведении ИК-спектроскопии НПВО, которые посчитали сходными с целлофаном, в ходе анализа поверхности не было выявлено вторичных ионов, характерных для целлофана. На сегодняшний день химический состав поверхности не был определен, но наличие пиков вторичных ионов, таких как NO2−, указывает на вероятное присутствие в составе азота. В ходе профилирования образцов по глубине в течение 25 сек. ионного распыления было замечено, что химический состав материала стал походить на целлофан (о чем свидетельствует увеличение ионов C3H3O2– на рис. 2). Данные профилирования образцов по глубине в ходе времяпролетной МСВИ (рис. 3) свидетельствуют о том, что основная масса этих образцов состоит из целлофана с неустановленным верхним слоем в третьей группе. 
Времяпролетная МСВИ поверхности двух последних образцов (отнесенных к четвертой группе) также продемонстрировала неизвестный верхний слой, отличающийся по химическому составу от основной массы (рис. 2 и 3). По всей видимости, 12-й образец содержал азот уже на уровне поверхности, не доходя до полипропиленового состава основной массы. Как представляется, химический состав поверхности и основной массы 3-го образца был сходен с метакрилатным полимером с наличием фосфатов в основной массе. Следует отметить, что, хотя во всех образцах были обнаружены очень низкие показатели содержания различных производных фосфат-ионов, их содержание было крайне низким и ограничивалось маленькими фосфатными группами.

РФЭС Элементарный количественный анализ состава поверхности пленок посредством РФЭС представлен в табл. 1. Пленки были распределены на группы, как было описано ранее. Из-за ограниченной доступности образцов 13 и 14 данные для РФЭС с использованием этих образцов не были получены. На основную часть элементарного состава всех пленок приходились углерод и кислород. Вариативность общего веса в процентах наблюдалась в пределах от 51 до 96% атомной массы и от 3 до 42% атомной массы соответственно. Некоторые микроэлементы (натрий, кальций, кремний и азот) бессистемно обнаруживались среди образцов. Фосфор (который использовался в качестве маркера дицетилфосфата) был обнаружен на поверхности всех пленок, но его содержание было стабильно низким (0–0,19% атомной массы). 11-й образец оказался единственным, в котором были выявлены значительные уровни хлора (~19% атомной массы), что сходится с предположением, возникшим в ходе проведения времяпролетной МСВИ, что эта пленка является уникальным образцом, имеющим хлорсодержащий или функционализированный поверхностный слой. 

СЭМ. Обнаружены значительные отличия в толщине ТПП (P < 0,001) с медианой 22,0 мкм (в диапазоне от 7,6 до 55,3 мкм) (табл. 2). Примечательно, что, помимо вариативности толщины между образцами разных групп, также была обнаружена вариативность толщины между образцами внутри одной группы, что подтвердилось определенными стандартными отклонениями.
 

Обсуждение результатов

Наше исследование продемонстрировало существенные различия в химических составах и физических свойствах тринадцати образцов тонких пластиковых пленок, используемых медицинскими учреждениями в Европе и в Северной Америке для окклюзии портосистемных шунтов у собак и кошек. Это первое исследование, которое предоставляет данные об ультраструктурных и химических особенностях поверхности, подповерхностных участков и основной массы этих пленок. Только у двух из тринадцати образцов, которые позиционировались как целлофан, можно было подтвердить принадлежность к целлофану во всех отношениях, и они соответствовали нашему контрольному образцу целлофана. Химический состав основной массы четырех образцов был характерен для целлофана, но данные ИК-спектроскопии НПВО и в особенности исследование поверхности с помощью времяпролетной МСВИ выявили специфические преобразования поверхности, то есть функционализированные слои, как показано на рис. 2 и 3. Значимость наличия верхних слоев, перекрывающих основную массу целлофана, как у образцов с функционализированным слоем, не ясна, но такое строение может оказывать воздействие на изменение процесса стимуляции воспалительной реакции, особенно при низкой концентрации маркеров предполагаемых воспалительных соединений. Пять образцов оказались полипропиленом на биологической основе, а у двух был выявлен уникальный химический состав, несмотря на некоторые общие с другими группами признаки. 
Ни один вид химического анализа не показал значительное количество компонента, который, предположительно, является триггером воспалительного процесса (дицетилфосфат). Тот компонент, который мог бы представлять собой значительное количество раздражителя, остается предметом дискуссии. Даль с соавторами (Dahl et al., 1960)5 задействовали 5%-ный и 10%-ный концентраты дицетилфосфата, чтобы индуцировать фиброз у лабораторных крыс. В экспериментальном исследовании с участием собак использовали от 0,5 до 1 мг чистого дицетилфосфата, чтобы индуцировать плевродез10. Поэтому маловероятно, что небольшое количество дицетилфосфата, обнаруженное в ТПП, можно считать значительным, и, скорее всего, оно является загрязнением ТПП, если основываться на экспертном мнении двух авторов (Piggott M.J., Scurr D. J.). 
На основании данных результатов сложно сказать, можно ли будет когда-нибудь рассматривать воспалительный процесс после имплантации этих ТПП воспроизводимой процедурой. 
ИКФС нестерилизованных и стерилизованных пленок показала, что оба метода стерилизации не привели к изменению спектральных характеристик образцов, что указывает на отсутствие индуцирования изменения их химического состава. К данным результатам следует отнестись с особым вниманием, поскольку просвечивающая инфракрасная спектроскопия – это метод анализа образцов во всем объеме, и существует вероятность того, что процесс стерилизации оказал воздействие только на поверхность пленок. Два образца были равным образом окрашены, и после стерилизации краситель выделился на поверхность вокруг образцов. Значение этого результата не ясно, но можно предположить, что есть вероятность выделения красителя в клинических условиях, и этот эффект следует учитывать. Однако в целом наши начальные данные указывают на то, что пленки, используемые для окклюзии портосистемных шунтов хирургическим путем, следует подвергать стерилизации паром. 
Выбор методов анализа был основан на толщине образцов и на предположительной концентрации соединений в образцах. Толщина образцов была задокументирована в соответствии с данными предыдущих исследований19, а применение СЭМ было признано наиболее подходящим методом измерения толщины образцов. Предварительное исследование (данные отсутствуют), где использовался анализ с индуктивно-связанной плазмой, было проведено для оценки сравнительной концентрации фосфора, который, вероятно, мог содержаться в ТПП. 
Полученные результаты продемонстрировали необходимость проведения последующего анализа с комбинированием РФЭС, ИК-спектроскопии НПВО и времяпролетной МСВИ. Данное исследование активно демонстрирует выраженную разнородность химических составов изученных бандажей, и полученные результаты вынуждают задать закономерный вопрос о воспроизводимости процедуры окклюзии портосистемного шунта с применением различных пленок. Вероятно, первоначальные значимые работы об использовании «целлофановых бандажей» для окклюзии портосистемных шунтов7,8,22 не использовали сходные образцы (данные по некоторым из этих исследований недоступны), и не ясно, был ли в них использован целлофан или другие ТПП. Исходя из результатов нашего исследования представляется вероятным, что химический состав и ультраструктурные соединения этих бандажей были разными. В связи с этим рекомендации, содержащиеся в данных работах, действительны только в случае использования одинаковых бандажей. Целесообразно также полагать, что результаты исследований отдельных организаций могут быть основаны только на внутреннем контроле и не опираться на известные опубликованные исследования. 
Это может иметь особо важное значение, если рассматривать положения рецензированных клинических исследований относительно применения таких бандажей в хирургии, которые были одобрены большинством хирургов (например, методы размещения «целлофанового бандажа» без натяжения вокруг аномального сосуда или складывания «бандажа» три раза перед имплантацией основаны на исследованиях, в которых использовались различные типы «бандажей»). Есть вероятность, что данная вариативность между различными бандажами сохранится в ветеринарном сообществе при сохранении концепции, что все ТПП, используемые для окклюзии шунтов, равноценные. 
Мы считаем, что для подбора ТПП необходимо разработать более жесткую стандартизацию для поддержания надежности процедуры окклюзии портосистемных шунтов в хирургических условиях.

Декларация о конфликте интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов

Список литературы:
  1. Ameen A. P., Short R. D., Johns R., Schwach G. The surface analysis of implant materials. 1. The surface composition of a titanium dental implant material. Clin Oral Implants Res, 4: 144–150, 1993.
  2. Anderson T. S., Rance G., Jiang L., Piggott M., Field E., Chanoit G. Changes in chemical and ultrastructural composition of ameroid constrictors following in vitro expansion. PLoS ONE 15, 13 (11), 2018.
  3. Belu A. M., Graham D. J., Castner D. G. Time-of-flight secondary ion mass spectrometry: techniques and applications for the characterization of biomaterial surfaces. Biomaterials, 24: 3635–3653, 2003.
  4. Cowley R. A., Yeager G. H. Treatment of aneurysms with follow-up studies on dicetyl phosphate; a report of thirty-six cases. Surgery, 34: 1032–1042, 1953.
  5. Dahl A. W., Fletcher T. L., Skinner Jr. H. H., Merendino K. A. Fibrosing properties, in the rat, of compounds related to dicetyl (DI-n-hexadecyl) phosphate-I. Biochem Pharmacol, 5: 231–237, 1960.
  6. Elsohaby I., McClure J. T., Riley C. B., Shaw R. A., Keefe G. P. Quantification of bovine immunoglobulin G using transmission and attenuated total reflectance in- frared spectroscopy. J Vet Diagn Investig, 28: 30–37, 2016.
  7. Frankel D., Seim H., MacPhail C., Monnet E. Evaluation of cellophane banding with and without intraoperative attenuation for treatment of congenital extrahepatic portosystemic shunts in dogs. J Am Vet Med Assoc, 228: 1355–1360, 2006.
  8. Hunt G. B., Kummeling A., Tisdall P. L., Marchevsky A. M., Liptak J. M., Youmans K. R., Goldsmid S. E., Beck J. A. Outcomes of cellophane banding for congenital portosystemic shunts in 106 dogs and 5 cats. Vet Surg, 33: 25–31, 2004.
  9. Lackowski W. M., Vasilyeva Y. B., Crooks R. M., Kerwin S. C., Hulse D. A. Microchemical and surface evaluation of canine tibial plateau leveling osteotomy plates. Am J Vet Res, 68: 908–916, 2007.
  10. Laforet E. G., Hering A. C. Intrapleural insufflation of dicetyl phosphate to promote pleural symphysis. Dis Chest, 44: 505–508, 1963.
  11. Landon B. P., Abraham L. A., Charles J. A. Use of transcolonic portal scintigraphy to evaluate efficacy of cellophane banding of congenital extrahepatic portosystemic shunts in 16 dogs. Aust Vet J, 86: 169–179, 2008.
  12. Matiasovic M., Chanoit G., Meakin L., Tivers M. Retrospective evaluation of surgical treatment for congenital extrahepatic portosystemic shunts by thin film banding versus ameroid constrictor placement in dogs. Vet Surg, 2019. https:// doi.org/10.1111/vsu.13273. (Epub ahead of print).
  13. McAlinden A. B., Buckley C. T., Kirby B. M. Biomechanical evaluation of different numbers, sizes and placement configurations of ligaclips required to secure cello- phane bands. Vet Surg, 39: 59–64, 2010.
  14. Nelson N. C., Nelson L. L. Imaging and clinical outcomes in 20 dogs treated with thin film banding for extrahepatic portosystemic shunts. Vet Surg, 45: 736–745, 2016. 
  15. Ribuffo D., Lo Torto F., Giannitelli S. M., Urbini M., Tortora L., Mozetic P., Trombetta M., Basoli F., Licoccia S., Tombolini V., Cassese R., Scuderi N., Rainer A. The effect of post-mastectomy radiation therapy on breast implants: unveiling bio- material alterations with potential implications on capsular contracture. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl, 57: 338–343, 2015.
  16. Schaub S., Hartmann A., Schwarz T., Kemper K., Pueckler K. H., Schneider M. A. Comparison of contrast-enhanced multidetector computed tomography angiography and splenoportography for the evaluation of portosystemic-shunt occlusion after cellophane banding in dogs. BMC Vet Res, 12: 283, 2016.
  17. Schonwalder S. M., Bally F., Heinke L., Azucena C., Bulut O. D., Heissler S., Kirschhofer F., Gebauer T. P., Neffe A. T., Lendlein A., Brenner-Weiss G., Lahann J., Welle A., Overhage J., Woll C. Interaction of human plasma proteins with thin gelatin-based hydrogel films: a QCM-D and ToF-SIMS study. Biomacromolecules, 15: 2398–2406, 2014.
  18. Sereda C. W., Adin C. A. Methods of gradual vascular occlusion and their appli- cations in treatment of congenital portosystemic shunts in dogs: a review. Vet Surg, 34: 83–91, 2005.
  19. Smith R. R., Hunt G. B., Garcia-Nolen T. C., Stump S., Stover S. M. Spectroscopic and mechanical evaluation of thin film commonly used for banding congenital por- tosystemic shunts in dogs. Vet Surg, 42: 478–487, 2013.
  20. Tam S. K., Dusseault J., Polizu S., Menard M., Halle J. P., Yahia L. Physicochemical model of alginate-poly-L-lysine microcapsules defined at the mi- crometric/nanometric scale using ATR-FTIR, XPS, and ToF-SIMS. Biomaterials, 26: 6950–6961, 2005.
  21. Yeager G. H., Cowley R. A. Studies on the use of polythene as a fibrous tissue stimulant. Ann Surg, 128: 509–519, 1948.
  22. Youmans K. R., Hunt G. B. Cellophane banding for the gradual attenuation of single extrahepatic portosystemic shunts in eleven dogs. Aust Vet J, 76: 531–537, 1998.
  23. Youmans K. R., Hunt G. B. Experimental evaluation of four methods of progressive venous attenuation in dogs. Vet Surg, 28: 38–47, 1999.